移動相は血液の液相に相当します。など、使用時に注意すべき点はさまざまです。その中には注意しなければならない「落とし穴」がいくつかあります。
01. 有機溶媒添加後の移動相のpHを測定します
有機添加剤を使用して pH を測定すると、得られる pH は有機溶媒を添加する前とは異なります。ただし、最も重要なことは一貫性を保つことです。常に有機溶媒を加えた後に pH を測定する場合は、他の人が同じ方法に従うように、使用した方法の手順を必ず明記してください。この方法は 100% 正確ではありませんが、少なくとも方法の一貫性は保たれます。これは、正確な pH 値を取得することよりも重要である可能性があります。
02. バッファーは使用しません
緩衝液の目的は、pHを制御し、その変化を防ぐことです。他の多くの方法では移動相の pH を変更するため、保持時間、ピーク形状、ピーク応答が変化する可能性があります。
ギ酸、TFAなどは緩衝剤ではありません
03. 通常のpH範囲内の緩衝液を使用しない
各バッファーには 2 pH 単位の範囲幅があり、その範囲内で最高の pH 安定性が得られます。この範囲外の緩衝液は、pH 変化に対する有効な耐性を提供しません。正しい範囲のバッファーを使用するか、必要な pH 範囲をカバーするバッファーを選択してください。
04. 有機溶液に緩衝液を加える
緩衝液を有機相と混合すると、緩衝液が沈殿する可能性が高くなります。多くの場合、降水が発生したとしても、それを検出することは依然として困難です。常に有機溶液を水相に添加することを忘れないでください。これにより、緩衝液が沈殿する可能性が大幅に減少します。
05. ポンプで0%からの濃度勾配を混ぜる
現在入手可能なポンプは移動相を効果的に混合し、インラインで脱気できますが、あなたのメソッドを使用するすべての人が高品質のポンプを持っているわけではありません。 A と B を単一の溶液に混合し、100% インラインで実行します。
例えば、９５０ｍｌの有機出発混合物は、５０ｍｌの水と混合することによって調製することができる。この利点は、HPLC 間のばらつきを減らし、システム内での泡や沈殿の可能性を減らすことができることです。ポンプ混合物の比率は 95:5 ですが、これはボトル内での事前混合の保持時間も 95:5 であることを意味するわけではないことに注意してください。
06. バッファーの変更に適切な修飾酸 (塩基) を使用していない
使用している緩衝塩を形成する酸または塩基のみを使用してください。たとえば、リン酸ナトリウム緩衝液は、リン酸または水酸化ナトリウムのみを使用して調製する必要があります。
07. 5gのバッファーを追加するなど、メソッド内にバッファーに関するすべての情報が記載されていない。リン酸ナトリウムを水1000mlに溶かす.
緩衝液の種類によって、緩衝可能な pH 範囲が決まります。必要な濃度によって緩衝液の強度が決まります。 5 グラムの無水リン酸ナトリウムと 5 グラムのリン酸一ナトリウム一水和物は、緩衝強度が異なります。
08. 検査前の有機溶剤の添加
以前の方法ではベースライン B に緩衝液を使用し、今回の方法ではベースライン B に有機溶液を使用した場合、ポンプ チューブとポンプ ヘッドに緩衝液を沈殿させることができると考えられます。
09. ボトルを持ち上げて、最後の一滴を空にします
分析全体を完了するのに十分な移動相が不足し、サンプルが発煙する可能性が十分にあります。ポンプ システムとカラムが焼損する可能性があるほか、移動相が完全に蒸発し、ボトル上部の移動相が変化します。
10. 超音波脱気移動相を使用する
最も重要な点は、すべての緩衝塩が溶解していることを確認することですが、これは最悪の脱気方法であり、移動相が急速に加熱され、有機成分が蒸発してしまいます。後で不要なトラブルを避けるために、5 分間かけて移動相を真空濾過してください。
投稿日時: 2024 年 8 月 27 日